牛細(xi)小(xiao)病毒(du)（BPV）核酸檢測試劑(ji)盒(he)（熒光 PCR 法）

【產品名稱】

通用名稱：牛細(xi)小(xiao)病毒（BPV）核酸檢(jian)測試劑盒（熒光 PCR 法）

Name：Bovine Parvovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】50T/盒

【預(yu)期用途(tu)】牛細小病毒病是由牛細小病毒感染引起的一種接觸性傳染病。該病主要臨床特征是母牛生殖機能障礙和犢牛呼吸道、消化道疾病。該病毒主要經口(kou)和(he)空氣等途徑傳遞。

本試劑盒(he)適用(yong)于檢測腹(fu)瀉糞便、腸系膜(mo)淋巴(ba)結(jie)、肝臟、腎、肺、肝、腦、睪(gao)丸、胎盤和淋巴(ba)結(jie)、全血(xue)等樣本中(zhong)的牛細(xi)小(xiao)(xiao)病(bing)毒，用(yong)于牛細(xi)小(xiao)(xiao)病(bing)毒感(gan)染的輔助診斷。

【檢驗原(yuan)理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針(zhen)法(fa)實時熒光 PCR 技術，設計一對牛細小病毒基因組特(te)異(yi)性引物，結合一條特(te)異(yi)性探針(zhen)，用熒光 PCR 技術對牛細小病毒基因組的 DNA 進行體外擴增(zeng)檢測(ce)，用于臨床(chuang)上對可疑感染者的病原(yuan)學診斷。

【試(shi)劑(ji)組成】

不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存(cun)條件及(ji)有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸(shu)、反(fan)復凍融次數不超過(guo) 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀(yi)器】

ABI 、安捷倫(lun) MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量(liang) PCR 檢測(ce)儀。

【標本采(cai)集】

捕殺(sha)牛(niu)：取肺(fei)部(bu)病變(bian)組織，5g；活(huo)牛(niu)：用滅菌棉(mian)拭子沾取牛(niu)氣管或眼鼻(bi)分泌物(wu)，然后(hou)置于(yu)裝有(you) 0.5mL 生理(li)鹽(yan)水的(de)離心管中。

【保存和運輸(shu)】

上述標本短期內可保存(cun)于-20℃，長期保存(cun)可置-70℃，但不能超過 6 個(ge)月，標本運送應采用(yong) 2~8℃冰袋運(yun)輸， 嚴禁反復凍融(rong)。

1. 樣品處理（樣本處理區）

取(qu)動物(wu)組(zu)織及其制品(pin)、食(shi)品(pin)或(huo)飼料約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理(li)鹽水后(hou)繼續研(yan)磨，待勻漿(jiang)后(hou)轉(zhuan)至 1.5mL 滅(mie)菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。核(he)酸提取

1.3 核酸提(ti)取采用核酸提(ti)取或純化(hua)試劑（磁珠(zhu)法(fa)或離心柱法(fa)），請嚴格按照試(shi)劑(ji)盒說明(ming)書(shu)進行操作。

2. 試劑配(pei)制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總(zong)數(shu)，設所需要的 PCR 反應管(guan)管(guan)數(shu)為 N(N=樣本數(shu)+1 管(guan)陰性對照(zhao)+1 管(guan)陽性對照(zhao)；樣品每(mei)滿 10份(fen)，多配制 1 份(fen))，每(mei)測試(shi)反應體系配制如下表：

1. 結果分析判定

1.1 結果(guo)分析條件(jian)設定

設置 Baseline 和 Threshold：一(yi)般直接按機器(qi)自動分(fen)析(xi)的(de)結果分(fen)析(xi)，當曲線(xian)出現整(zheng)體傾斜時，根據分(fen)析(xi)后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nei)調節(jie))、stop 值(一般(ban)可在 5~20 范(fan)圍內調節)，以及 Threshold 的(de)Value 值(上(shang)下(xia)拖動閾值線至高于陰性對照(zhao))，重新分(fen)析結果。

1.2 結果判斷

陽性：檢測通道(dao) Ct 值≤35，且(qie)曲線有明(ming)顯的指(zhi)數增長曲線；

可疑(yi)：檢測(ce)通道 35<Ct 值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道(dao)仍為(wei) 35<Ct 值(zhi)≤38，且曲線有明(ming)顯(xian)的(de)增長曲線， 判定為陽性，否則為陰(yin)性；

陰性：樣本檢(jian)測結果(guo) Ct 值(zhi)>38 或無 Ct 值(zhi)。

2. 質控標準

陰性(xing)質(zhi)控品：Ct>38 或(huo)無(wu) Ct 值(zhi)顯示；

陽(yang)性質(zhi)控品：擴增曲線(xian)有明顯指數(shu)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效(xiao)。

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項】

? 所有操作嚴格按照說明書進行；檢(jian)驗過程(cheng)中(zhong)，參照《GB/T 27403 實(shi)驗室質量控制規(gui)范 食(shi)品分子(zi)生物(wu)學檢測》的規(gui)定進(jin)行(xing)。

? 試劑盒內各種組(zu)分使用(yong)前應自然融化，混(hun)勻并短暫離心；

? 反(fan)應(ying)液應(ying)避(bi)光保(bao)存；

? 反應(ying)中盡(jin)量(liang)避免氣(qi)泡存在，管(guan)蓋(gai)需蓋(gai)緊(jin)；

? 使用(yong)一(yi)次(ci)性吸(xi)頭、一(yi)次(ci)性手(shou)套(tao)和各(ge)區工作服(fu)；

? 樣本處理、試(shi)劑配制、加樣需在(zai)不同區(qu)進行，以(yi)免交叉污染；

? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或(huo)紫外燈處理工(gong)作臺和移液器(qi)；

? 試(shi)劑盒里所有物(wu)品應(ying)視為污染物(wu)對待(dai)，并按照《微(wei)(wei)生物(wu)生物(wu)醫學實(shi)驗室生物(wu)安全   通則》進行處理。

滬崢(zheng)PCR優勢：

&nbsp;  1.   特異性(xing)：所有(you)產品使用(yong)的(de)引物(wu)均經過詳盡的(de)生物(wu)信息學(xue)分析，經過GenBank及(ji)自(zi)建(jian)龐大數據庫的(de)比(bi)對，確保
所(suo)用的(de)每一(yi)條引物均為(wei)種屬(shu)或血(xue)清型(xing)特(te)(te)異的(de)基因(yin)序列區段，可實現對(dui)細菌種屬(shu)及血(xue)清型(xing)的(de)特(te)(te)異檢測。

&nbsp;  2.   重(zhong)現性：該(gai)系列所有產品均(jun)經(jing)過大量(liang)實(shi)驗(yan)菌(jun)株(zhu)的驗(yan)證。

   3.   靈敏性：該系(xi)列產品(pin)可實現對檢(jian)測菌(jun)的(de)高靈敏檢(jian)測，當樣品(pin)中(zhong)細菌(jun)的(de)濃度達到(dao)103cfu/ml時，可實現對其的(de)直(zhi)接(jie)檢(jian)測，無需繁瑣的(de)增菌(jun)過(guo)程。

   4.   實用性：檢測(ce)范圍廣，涵蓋(gai)了對(dui)人體危(wei)害(hai)較為(wei)嚴(yan)重的(de)17種呼吸道及腸道致病菌(jun)，可實現(xian)對(dui)臨床樣品(pin)及其他環(huan)境取樣的(de)快(kuai)速檢測(ce)，整個(ge)檢測(ce)過程為(wei)3-4個(ge)小時。