牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)

【產品名稱】

通用名稱：牛(niu)腺病毒 3 型（BAV-3）核酸檢測試劑(ji)盒（熒光 PCR 法）

Name：Bovine Adenovirus Detection Kit（Real-Time PCR Method）

【包裝規(gui)格】50T/盒

【預期用途】

牛(niu)腺病毒 3 型(xing)（BAV-3）是引起(qi)牛呼吸道疾病的(de)主要(yao)(yao)病原體(ti)之一(yi)，特別(bie)是新生犢牛。臨床癥(zheng)狀(zhuang)包括發燒，呼吸困難，鼻(bi)腔和眼結膜有(you)分泌物等。病理變化主要(yao)(yao)出現在(zai)肺(fei)部(bu)，具有(you)鮮明的(de)肺(fei)小葉、肺(fei)氣腫(zhong)和突變。血清(qing)學調查表明該病廣泛(fan)分(fen)布于世界(jie)各地，給(gei)養牛業造成巨大經濟(ji)損失。

本(ben)試(shi)劑盒適用于檢測肺組織、呼吸(xi)道及眼鼻分泌物等(deng)樣本(ben)中的(de)牛腺病毒 3 型，用于(yu)牛腺病(bing)毒 3 型(xing)感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑(ji)盒采用 TaqMan 探(tan)針法(fa)實(shi)時熒光 PCR 技術，設計一對牛腺病毒(du) 3 型基因保守區特異性引(yin)物(wu)，結合一條特(te)異(yi)性探針，用熒光 PCR 技術對(dui)牛腺病毒(du) 3 型基因保(bao)守區的 DNA 進行(xing)體外(wai)擴增(zeng)檢(jian)測，用于臨床上對可疑感染(ran)者(zhe)的(de)病原學診斷。

【試劑組成】

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不(bu)超(chao)過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系(xi)列熒光定(ding)量 PCR 檢測儀。

【標本(ben)采集】

捕殺牛：取肺部(bu)病變組織，5g；活牛：用滅(mie)菌棉拭子沾取牛氣管或眼鼻分(fen)泌(mi)物，然后置于裝有 0.5mL 生(sheng)理鹽水的(de)離心管中。

【保存(cun)和運輸】

上述標本短(duan)期內可保存于-20℃，長期保(bao)存可置(zhi)-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應(ying)采用 2~8℃冰袋(dai)運輸， 嚴禁反復凍(dong)融。

1. 樣(yang)品處理(li)(li)（樣(yang)本處理(li)(li)區）

取動物組織及其(qi)制品、食品或飼料(liao)約 1g，手術剪(jian)剪(jian)碎混勻后取(qu) 0.5g 于研(yan)磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水(shui)后(hou)(hou)繼續研磨(mo)，待(dai)勻漿后(hou)(hou)轉至 1.5mL 滅菌離心管(guan)中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅(mie)菌離心管中。核酸提取(qu)

1.3 核酸提取(qu)采用核(he)酸提取(qu)或純(chun)化(hua)試劑（磁珠法(fa)或(huo)離心柱(zhu)法(fa)），請嚴格(ge)按照試(shi)劑盒說(shuo)明書(shu)進行操(cao)作。

2. 試劑配(pei)制（試劑準(zhun)備(bei)區）

根據待檢測(ce)樣(yang)本總數(shu)(shu)，設所需要的 PCR 反(fan)應(ying)管管數(shu)(shu)為 N(N=樣(yang)本數(shu)(shu)+1 管陰(yin)性對照+1 管陽(yang)性對照；樣(yang)品每滿(man) 10份，多配(pei)制 1 份)，每測(ce)試反(fan)應(ying)體(ti)系配(pei)制如下表：

1. 結果分析判定

1.1 結果分(fen)析條件設定(ding)

設置(zhi) Baseline 和(he) Threshold：一(yi)般直(zhi)接(jie)按(an)機器(qi)自動分析的結果(guo)分析，當曲線出現(xian)整體(ti)傾斜時(shi)，根(gen)據分析后圖像調(diao)節(jie) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調(diao)節(jie))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的Value 值(zhi)(上(shang)下拖動閾值線(xian)至高(gao)于陰性對照(zhao))，重新(xin)分析結(jie)果(guo)。

1.2 結果判斷(duan)

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且(qie)曲線有明顯(xian)的指數增(zeng)長(chang)曲線；

可疑：檢測通(tong)道 35<Ct 值≤38，建議重復檢(jian)測，如果檢(jian)測通道仍(reng)為 35<Ct 值(zhi)≤38，且曲線有明(ming)顯的(de)增(zeng)長曲線， 判定為(wei)陽性，否則為(wei)陰(yin)性；

陰性：樣本(ben)檢(jian)測(ce)結果(guo) Ct 值>38 或(huo)無 Ct 值(zhi)。

2. 質控(kong)標(biao)準

陰性(xing)質控品：Ct>38 或無(wu) Ct 值(zhi)顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上(shang)條(tiao)件應同時滿(man)足，否則實驗視為無效(xiao)。

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)【注意(yi)事項】

? 所(suo)有操作嚴格按照說明(ming)書(shu)進(jin)行(xing)；檢驗(yan)過程中(zhong)，參照《GB/T 27403 實驗室質量(liang)控制規范 食品分子生物學檢測》的規定進行(xing)。

? 試(shi)劑盒(he)內各種組分使用前應自然融化，混勻(yun)并短暫離心(xin)；

? 反應液(ye)應避光(guang)保存；

? 反應中盡(jin)量避免氣泡存在，管蓋(gai)需蓋(gai)緊；

? 使(shi)用一次(ci)性吸頭、一次(ci)性手套和各(ge)區工作服；

? 樣本處理、試劑配制、加樣需(xu)在不同區(qu)進行(xing)，以免(mian)交(jiao)叉污染；

? 實驗完(wan)畢后用 10%次氯酸或 75%酒精(jing)或紫外(wai)燈處理工作(zuo)臺和移(yi)液器；

? 試劑盒里所有物品應(ying)視為污染(ran)物對待，并按照《微生(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)物醫學實驗室(shi)生(sheng)(sheng)物安全(quan)   通則》進行處理。

滬(hu)崢(zheng)PCR優勢：

   1.   特異性：所有產品使用的引(yin)物均經(jing)過(guo)詳盡(jin)的生(sheng)物信息學分析(xi)，經(jing)過(guo)GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保(bao)
所用的每一(yi)條引(yin)物均為種(zhong)屬或血(xue)清(qing)型特異的基(ji)因(yin)序列區段(duan)，可實現對細菌種(zhong)屬及血(xue)清(qing)型的特異檢(jian)測(ce)。

   2.   重現性：該系列所有產品(pin)均經過大量實驗(yan)菌株的驗(yan)證。

&nbsp;  3.   靈敏性：該系列(lie)產品可實現(xian)對檢(jian)測菌的(de)高靈敏檢(jian)測，當樣品中細(xi)菌的(de)濃度達到103cfu/ml時，可實現(xian)對其的(de)直接檢(jian)測，無需(xu)繁瑣(suo)的(de)增菌過(guo)程。

   4.   實用(yong)性：檢(jian)(jian)測范圍(wei)廣，涵蓋了對人體危害(hai)較為嚴重的17種呼吸道(dao)及(ji)腸(chang)道(dao)致病菌，可實現(xian)對臨床樣品及(ji)其(qi)他環境取(qu)樣的快速(su)檢(jian)(jian)測，整個檢(jian)(jian)測過程為3-4個小時。