【檢驗原理】本試劑盒采(cai)用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，設計一對馬源性成分(Horse)保守區特異性引物結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對馬源性成分(Horse)保守(shou)區的DNA進行體外擴增檢測(ce)，從(cong)而達到(dao)快速檢測(ce)之目的。

轉基因水稻LLRICE62試劑盒(熒光-PCR法)【試劑組成】

注(zhu)：

1） 不同批(pi)號試(shi)劑(ji)不能混用。

2） 試劑盒內各試劑組份足夠(gou)包裝規格(ge)所標示的檢測(ce)次數。

【儲(chu)存(cun)條(tiao)件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸(shu)、反復凍融次數不超過 5 次。有效期 12 個月。

【適用儀器(qi)】

ABI 、安捷(jie)倫 MX3000P/3005P、LightCycle、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(ce)儀(yi)。

【標(biao)本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。

【保存和運輸】上述標本短期內可保存(cun)于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2-8℃冰(bing)袋(dai)運(yun)輸(shu)

1. 樣品處理(li)(li)（樣本處理(li)(li)區）

取動物組織及其(qi)制品、食(shi)品或(huo)飼料約 1g，剪碎混勻后取 0.5g 于研(yan)磨器中研(yan)磨(mo)，加入(ru) 1.5mL 生理鹽水后繼(ji)續研(yan)磨，待勻漿后轉至(zhi) 1.5mL 滅菌離(li)心管(guan)中(zhong)， 8000rpm 離(li)心 2min，取上(shang)清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心(xin)管中。

1.2 核酸(suan)提取

1.3 提取采用提取或試劑（磁珠法或離心柱法），請嚴(yan)格按照試劑盒說明書進(jin)行操作。

2. 試劑配(pei)制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所(suo)需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 10份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

5. 結果分析判定

• 結(jie)果分(fen)析條(tiao)件(jian)設(she)定

設置(zhi) Baseline 和 Threshold：一(yi)般直接按(an)機器自動(dong)分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調(diao)節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍(wei)內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的(de) Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2 判斷

a) 檢測通(tong)道(dao) Ct 值≤35，有 FAM 熒光信號檢出，并出現典型的擴增曲線，判斷樣品為陽性。

b) 當 30<Ct 值≤35 時，且有(you)典型的擴增(zeng)曲線時，則(ze)需重復實驗。再次擴增(zeng)后檢測(ce)體(ti)系的Ct 值仍≤35，且有典型(xing)的(de)擴增(zeng)曲(qu)線，則(ze)判(pan)定該樣品含(han)有相應的(de)動物源性成分。當再次(ci)擴(kuo)增后，檢測體系 Ct 值＞35，或(huo)無典型的擴增(zeng)曲(qu)線(xian)，則(ze)判定(ding)該樣品不含相應(ying)的動物源性成分。

6. 質控標準

a) 空白對照(zhao)：無(wu)FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35，未出現典型的擴(kuo)增曲線。

b) 陰性(xing)對照：無FAM 熒光信號(hao)檢出或 Ct 值≥35，未出(chu)現(xian)典型(xing)的擴增曲線(xian)。

c) 陽性對照：有 FAM 熒光(guang)信號檢(jian)出，并(bing)出現典型的(de)擴增曲線，Ct 值＜30。

d) 以上應同(tong)時滿足，否(fou)則本次實驗無效(xiao)。

轉基因水稻LLRICE62試劑盒(熒光-PCR法)【注(zhu)意事項(xiang)】

? 所有操(cao)作(zuo)嚴格(ge)按照(zhao)說明書進行；檢驗過程中，參照(zhao)《GB/T 27403 實(shi)驗室質量(liang)控制(zhi)規范 食(shi)品分(fen)子生物(wu)學檢(jian)測》的規定進行。

? 試劑盒內各種(zhong)組分使用前(qian)應自然融化，混勻(yun)并短暫(zan)離心；

? 反(fan)應(ying)液應(ying)避(bi)光(guang)保存；

? 反應(ying)中盡量(liang)避免(mian)氣(qi)泡(pao)存在，管(guan)蓋需(xu)蓋緊；

? 使用一次性(xing)吸頭、一次性(xing)手套和各區工作服(fu)；

? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同(tong)區進行(xing)，以(yi)免(mian)交叉污染；

? 實(shi)驗完畢后(hou)用 10%次氯酸或(huo) 75%酒精或紫(zi)外燈(deng)處理工作臺和移液器；

? 試(shi)劑(ji)盒里所有物(wu)品應視(shi)為污(wu)染(ran)物(wu)對待，并按照《微(wei)生物(wu)生物(wu)醫(yi)學實驗室(shi)生物(wu)安(an)全   通則(ze)》進行處理。

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滬崢PCR優勢：

  &nbsp;1.   特異性：所(suo)有產品使用的(de)引物(wu)均經(jing)過(guo)(guo)詳(xiang)盡的(de)生物(wu)信息學分析(xi)，經(jing)過(guo)(guo)GenBank及自建龐(pang)大(da)數(shu)據(ju)庫的(de)比(bi)對，確保
所用的每(mei)一條引物均為種屬或(huo)血清型特(te)(te)異的基因序列區段(duan)，可實現對細菌種屬及(ji)血清型的特(te)(te)異檢(jian)測(ce)。

   2.   重現性：該系列(lie)所有產品均經過(guo)大量實驗(yan)菌株的驗(yan)證。

   3.   靈(ling)敏性：該系列(lie)產(chan)品可實現對檢測(ce)菌的(de)高靈(ling)敏檢測(ce)，當樣(yang)品中細菌的(de)濃度達到103cfu/ml時，可實現對其(qi)的(de)直接(jie)檢測(ce)，無需繁瑣的(de)增菌過(guo)程。

   4.   實(shi)用(yong)性(xing)：檢(jian)測(ce)范圍廣，涵(han)蓋了對人體危(wei)害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shi)現對臨床(chuang)樣品(pin)及其他環境取樣的快速(su)檢(jian)測(ce)，整個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程為3-4個(ge)小(xiao)時。

P CR實驗概述(shu)