人正常結腸上皮細胞；NCM460

細胞(bao)英文(簡稱）：NCM460

細(xi)胞名稱：人正常結腸上(shang)皮細(xi)胞；NCM460

背景資料

收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)(bao)，請查(cha)看瓶(ping)(ping)子是(shi)否有破(po)裂，培(pei)養基是(shi)否漏出，是(shi)否渾濁，如(ru)(ru)有請盡(jin)快(kuai)和(he)我們聯系。如(ru)(ru)包裝完好，取出25cm2培(pei)養瓶(ping)(ping)，75%酒精消毒,拆下封口(kou)膜,在(zai)顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)(bao)形態是(shi)否正常，細(xi)胞(bao)(bao)的(de)貼壁情況以(yi)及細(xi)胞(bao)(bao)密度,然(ran)后放(fang)入37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養箱中靜置2-3小(xiao)時，以(yi)穩(wen)定細(xi)胞(bao)(bao)狀態。 

細胞(bao)來(lai)源：incell

代次：P3

規格：T25

細胞數：1x10^6 cells

組織來源：結腸上皮(pi)

人正常結腸上皮細胞；NCM460形態：貼壁

細胞活力(li)：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xi)胞檢(jian)測(ce)：細(xi)胞不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵母和(he)真菌

培(pei)養條件：1640+10% FBS；37℃，5% CO2    

傳(chuan)代方(fang)法：*建議1:2-1:3 兩(liang)天換(huan)液一次(ci)

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

動物細胞培養,大致的步驟是這樣:

1.從動(dong)物胚胎或者(zhe)一(yi)些剛(gang)出生的(de)動(dong)物的(de)器官或者(zhe)組織上取得細胞,配(pei)制(zhi)成細胞懸浮液.把細胞液放到(dao)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong),在培(pei)養(yang)箱里(li)培(pei)養(yang)--------原代(dai)培(pei)養(yang).

但是,不(bu)要(yao)以(yi)為這樣就能(neng)一直無限培(pei)養下去.

因為人正常結腸上皮細胞；NCM460在那個瓶壁上生長的時候,如果大量增殖,細胞之間會彼此相碰,細胞細胞就會停止分裂增殖,出現一種接觸抑制.

2.我們(men)為(wei)了(le)它們(men)能繼(ji)續增殖,就用胰蛋(dan)白酶再(zai)把它們(men)分開,然后再(zai)配制成細胞懸浮(fu)液,分開裝到好幾(ji)個瓶子里繼(ji)續培養--------傳代(dai)培養.

1.      棄去培養上(shang)清，用(yong)不含(han)鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

2.      加(jia)2ml消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，置于37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2分(fen)(fen)鐘，然后在顯微(wei)鏡下觀察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大部分(fen)(fen)變圓并脫落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下培(pei)養瓶(ping)后加(jia)少(shao)量培(pei)養基終止消(xiao)化(hua)。
3.      按6-8ml/瓶補加(jia)培(pei)養(yang)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件(jian)下離心4分鐘，棄去上清液，補加(jia)1-2mL培(pei)養(yang)液后吹勻。
4.      將細胞懸液按1：2到1：5的(de)比(bi)例分到新的(de)含8ml培養(yang)基的(de)新皿中或者瓶中。
3）細胞(bao)(bao)(bao)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)：待細胞(bao)(bao)(bao)生長(chang)狀態良好時，可進行細胞(bao)(bao)(bao)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)。貼(tie)壁細胞(bao)(bao)(bao)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)時，棄去培(pei)養基后加(jia)入少量胰酶，細胞(bao)(bao)(bao)變(bian)圓脫(tuo)落后，加(jia)入約1ml含血清的培(pei)養基后加(jia)入凍(dong)(dong)存(cun)(cun)管中，再添加(jia)10%DMSO后進行凍(dong)(dong)存(cun)(cun)。
 
注意事項：
1. 收到細胞后(hou)，若發現干冰(bing)已揮發干凈、凍存管(guan)瓶(ping)蓋脫(tuo)落(luo)、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2. 所有(you)動物細胞(bao)均(jun)視為(wei)有(you)潛在的生(sheng)物危害(hai)性，必(bi)須在二級(ji)生(sheng)物安(an)全臺內操作，并請(qing)注(zhu)意防護，所有(you)廢液及接(jie)觸過此細胞(bao)的器皿需要滅菌后方能丟棄。