細胞培養(yang)中常見(jian)的污染情況總結如下:
常見的污(wu)染(ran)如下：
1、細(xi)菌：細(xi)菌在普(pu)通倒置顯(xian)微鏡(jing)下為黑色(se)細(xi)沙狀，根(gen)據感染細(xi)菌的(de)(de)不(bu)(bu)同(tong)，可有(you)不(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)外形，培養液一般會渾濁變黃，對細(xi)胞生長影(ying)響明顯(xian)。
仔(zi)細檢查(cha)一下器皿(min)的滅菌情況，是否在(zai)(zai)高(gao)壓滅菌時放氣時間足(zu)夠，壓力足(zu)夠！尤其是和儲存培養液(ye)接觸(chu)的移液(ye)管等(deng)物(wu)品(pin)，連續兩次(ci)污染(ran)的話(hua)有可(ke)能造成(cheng)儲存液(ye)污染(ran)，一定要注意！下次(ci)使用前(qian)檢查(cha)一下培養液(ye)是否存在(zai)(zai)渾濁的現象！
可在培養液中加相應(ying)的抗生素處理(li)

2、霉菌：培養液是清亮的(de)，倒置顯(xian)微鏡下無(wu)雜質，37度孵(fu)箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀(zhuang)(zhuang)雜質，鏡下可見(jian)呈細(xi)絲狀(zhuang)(zhuang)的(de)團(tuan)狀(zhuang)(zhuang)漂浮物，可看到明(ming)顯(xian)的(de)菌絲，細(xi)胞仍可生長(chang)(chang)，但時間長(chang)(chang)之后，細(xi)胞的(de)活力(li)狀(zhuang)(zhuang)態(tai)變差，
用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤(pan)里也加(jia)上飽(bao)和量的硫酸銅。或者在(zai)培養(yang)箱的托盤(pan)加(jia)入(ru)飽(bao)和的消毒磷(lin)酸氫(qing)二鈉高鹽液體,可以(yi)防止霉菌(jun)污染。
CO2孵(fu)箱被霉菌污染后，可把(ba)所有細胞(bao)暫(zan)時(shi)轉移(yi)，采用過(guo)氧(yang)乙(yi)(yi)酸擦洗孵(fu)箱（包(bao)括隔板(ban)，箱壁）。并把(ba)過(guo)氧(yang)乙(yi)(yi)酸放置在(zai)孵(fu)箱內一個(ge)小時(shi)，使其(qi)蒸(zheng)汽彌漫。待(dai)過(guo)氧(yang)乙(yi)(yi)酸的(de)氣味消散(san)后，再移(yi)入(ru)細胞(bao)。孵(fu)箱應定期(qi)清潔（2月(yue)左右），尤其(qi)在(zai)多(duo)雨的(de)季(ji)節(jie)。
其(qi)它培養箱清洗(xi)方法是：用84液擦洗(xi)－清水擦洗(xi)－75%酒精擦洗(xi)－紫外(wai)燈(deng)照。
預防霉(mei)(mei)菌污(wu)染(ran)，可(ke)在培(pei)養(yang)基里加3u/ml的(de)兩性霉(mei)(mei)素(su)或制(zhi)霉(mei)(mei)菌素(su)或放(fang)線菌素(su)D或雙抗；但細胞一旦污(wu)染(ran)，很難挽救，制(zhi)霉(mei)(mei)菌素(su)或放(fang)線菌素(su)D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污(wu)染(ran)細胞。，將環境*消毒(du)，如(ru)果(guo)所有細胞都污(wu)染(ran)，可(ke)能是系統污(wu)染(ran)，檢查一下培(pei)養(yang)基和器材，如(ru)果(guo)只是個別污(wu)染(ran)，可(ke)能是操(cao)(cao)作(zuo)問題，就要注意(yi)操(cao)(cao)作(zuo) 

3、支原體：黑色的，好象多為多形，培(pei)養液一(yi)般會渾濁，原體感染，國內血(xue)清(qing)很多都沒有做支原體陰性檢測(ce)，而支原體是(shi)牛血(xue)清(qing)中zui常見的微(wei)生物之(zhi)一。而(er)且它(ta)不能(neng)用(yong)過濾的辦法(fa)除去。支原體感(gan)染細(xi)胞以后，細(xi)胞病變不很明(ming)顯(xian)，只是慢(man)(man)慢(man)(man)si去。
用(yong)(yong)泰(tai)樂菌素，獸用(yong)(yong)支原體(ti)病的藥，但可用(yong)(yong)于(yu)細胞培(pei)養(yang)，無(wu)任何不良反應。Sigma公司的使用(yong)(yong)時用(yong)(yong)50ug/ml Tylosin培(pei)養(yang)液培(pei)養(yang)6天或連續(xu)傳兩代即可清(qing)除(chu)支原體(ti)污染。如果(guo)作為常用(yong)(yong)的抗生素的話, 建議用(yong)(yong)8ug/ml的濃度。

4、黑(hei)(hei)蛟(jiao)蟲(chong)：可(ke)(ke)以(yi)穿透(tou)(tou)濾(lv)膜(mo)，也可(ke)(ke)以(yi)通過空(kong)氣傳播(bo)，低倍(bei)下為黑(hei)(hei)色點狀(zhuang)，高倍(bei)下可(ke)(ke)看見黑(hei)(hei)色的小蟲(chong)游來游去，培養液也是(shi)不渾的，一般不會(hui)太影響，細胞還是(shi)可(ke)(ke)以(yi)用的。常常是(shi)細胞生長狀(zhuang)態良好，且(qie)觀測到的運動(dong)物無明(ming)顯(xian)增(zeng)多，且(qie)培養液顏色、透(tou)(tou)明(ming)度無明(ming)顯(xian)變化，可(ke)(ke)在同一批(pi)號的血清養的細胞中(zhong)發現(xian)類似現(xian)象。對(dui)細胞生長狀(zhuang)態不會(hui)有明(ming)顯(xian)影響，在細胞增(zeng)殖旺(wang)盛之后會(hui)自(zi)然消失，除(chu)geng換血清(qing)外無須特(te)殊(shu)處理。建議(yi)如果(guo)細(xi)胞(bao)有可能是此種污(wu)染的話，可以(yi)增加細(xi)胞(bao)的種板密度，以(yi)提高細(xi)胞(bao)的生存率(lv)。

5、真菌(jun)：一(yi)般培養液(ye)清(qing)亮(liang)，不(bu)變色，鏡下有絲狀(zhuang)物，有些真菌(jun)開始(shi)很(hen)像死細(xi)胞(bao)(bao)碎(sui)片(pian)，只是(shi)它很(hen)多(duo)很(hen)多(duo)的小塊很(hen)清(qing)楚，象(xiang)珊瑚狀(zhuang)，不(bu)象(xiang)細(xi)胞(bao)(bao)碎(sui)片(pian)分不(bu)清(qing)，慢(man)慢(man)的會長出很(hen)細(xi)的黑色絲狀(zhuang)物。真菌(jun)生長的比(bi)較慢(man)，不(bu)象(xiang)細(xi)菌(jun)那么(me)容(rong)易被發現，但是(shi)一(yi)旦發現有它的存(cun)在細(xi)胞(bao)(bao)就被污染了，也很(hen)難(nan)救活了。

6、原(yuan)蟲：培養液可輕(qing)微渾濁，顯(xian)微鏡下那(nei)些細(xi)(xi)(xi)小(xiao)的(de)(de)點狀(zhuang)物數量(liang)非常(chang)多，輕(qing)微活動，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)雖然可以生(sheng)長(chang)(chang)但(dan)繁殖速度卻明顯(xian)減(jian)慢，而(er)且細(xi)(xi)(xi)胞(bao)狀(zhuang)態不(bu)好，邊(bian)緣(yuan)不(bu)清楚，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)不(bu)透亮(liang)。他(ta)們與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)可共(gong)生(sheng)但(dan)會(hui)與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)爭奪營養。這種(zhong)共(gong)生(sheng)是非常(chang)普遍(bian)的(de)(de)，但(dan)他(ta)們的(de)(de)數量(liang)小(xiao)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)站優勢所(suo)以不(bu)會(hui)影(ying)響到細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)正常(chang)生(sheng)長(chang)(chang)，只有(you)當他(ta)們到達一(yi)定的(de)(de)數量(liang)時就(jiu)會(hui)影(ying)響到細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)生(sheng)長(chang)(chang)，zui終形成惡性循環(huan)。

污染的可能原(yuan)因：可能原(yuan)因很多。比(bi)如配(pei)液消毒問(wen)題(ti)、操作問(wen)題(ti)、環境問(wen)題(ti)等等
關于(yu)培養(yang)基的無菌狀(zhuang)況，取培養(yang)基至培養(yang)瓶中（不加細(xi)胞），37度試培養(yang)一段時間后(hou)觀(guan)察。如(ru)果沒有細(xi)菌生長 就是操作(zuo)的問題(ti)。
也可以(yi)(yi)在培養(yang)基中事(shi)先加入雙(shuang)抗（硫(liu)酸(suan)鏈霉素(su)和氨芐青霉素(su)）。但雙(shuang)抗有時會(hui)影響細(xi)胞的(de)狀態，所以(yi)(yi)在做轉染、檢測細(xi)胞某項(xiang)指(zhi)標前一定要撤去(qu)雙(shuang)抗，以(yi)(yi)避免(mian)影響實驗結果。

1、孵(fu)箱應(ying)(ying)定期用三(san)氧機消毒 或者 紫外(wai)光照射，并用酒精和新潔(jie)爾滅試擦(ca)孵(fu)箱同時(shi)孵(fu)箱內的(de)水應(ying)(ying)是(shi)三(san)蒸水
2、超凈臺\取材\器材\培養(yang)液\培養(yang)瓶\操作(zuo)等(deng)因素
3、超凈臺的(de)風(feng)機不能(neng)(neng)過大，風(feng)機到6-8格(ge)。否(fou)則(ze)也可能(neng)(neng)能(neng)(neng)致霉菌污(wu)染
4、無(wu)菌室經甲醛熏蒸消(xiao)毒后，可用(yong)同等量的氨水噴灑中和，約幾(ji)小時即可進(jin)入(ru)操作。

1關于黑膠蟲的描述(shu)
1.1分類上(shang)的描述
對于黑(hei)膠(jiao)(jiao)蟲的(de)(de)分類(lei)，學術(shu)界沒(mei)有明確給予說(shuo)法。關于黑(hei)膠(jiao)(jiao)蟲的(de)(de)分類(lei)，目前大部分人認(ren)為黑(hei)膠(jiao)(jiao)蟲污(wu)染是微生物感染。在一(yi)些(xie)文章論述上把(ba)黑(hei)膠(jiao)(jiao)蟲歸為生物污(wu)染類(lei)型，但是沒(mei)把(ba)它(ta)歸為確定的(de)(de)生物分類(lei)類(lei)型，只(zhi)是把(ba)黑(hei)膠(jiao)(jiao)蟲du立為一種未知生(sheng)物。而根據中國(guo)病(bing)毒所和(he)軍科院鑒定(ding)是一種寄(ji)生(sheng)于牛血清內的一種原蟲，似(si)乎(hu)和(he)草履蟲和(he)變形蟲有類似(si)之處，但是由(you)于課題經(jing)費(fei)不(bu)夠而不(bu)能繼續(xu)下去(qu)，zui終也沒(mei)有(you)(you)有(you)(you)力證明黑膠(jiao)(jiao)蟲是(shi)(shi)屬于原蟲。也有(you)(you)一(yi)些學者不認(ren)為(wei)(wei)所謂的(de)黑膠(jiao)(jiao)蟲污染是(shi)(shi)一(yi)種生物(wu)污染，而認(ren)為(wei)(wei)是(shi)(shi)細(xi)胞碎片類物(wu)質，是(shi)(shi)在(zai)細(xi)胞培養(yang)時，細(xi)胞衰亡破裂產生的(de)；也有(you)(you)在(zai)文獻(xian)中(zhong)報道(dao)說是(shi)(shi)玻璃瓶中(zhong)類似(si)氧化(hua)硅的(de)物(wu)質，那個文獻(xian)很少人找(zhao)得到；還有(you)(you)報道(dao)黒膠(jiao)(jiao)蟲是(shi)(shi)一(yi)種納米級(ji)的(de)細(xi)菌(jun)。

1.2形態上的描述
形態(tai)上類似與(yu)桿狀細(xi)菌(jun)，但長度比(bi)細(xi)菌(jun)長，直徑(jing)約在0.5~1微米，不染(ran)色觀察為黑(hei)色；膠蟲成熟后呈線狀，而(er)且形態(tai)是橢圓(yuan)形。

1.3運動(dong)形式
在400X倒(dao)置顯微鏡(jing)小，有典型(xing)的(de)布朗運(yun)(yun)動(dong)(dong)（不規則(ze)的(de)原地小距離抖(dou)動(dong)(dong)），即很多(duo)細胞培養(yang)者看到的(de)，像黑(hei)色(se)的(de)小蟲游來游去。可(ke)以(yi)穿透濾(lv)膜，也可(ke)以(yi)通(tong)過空(kong)氣(qi)傳播，低倍下(xia)為黑(hei)色(se)點狀，高倍下(xia)可(ke)看見黑(hei)色(se)的(de)小蟲游來游去。但是在物理學(xue)上來說，顆(ke)粒足夠小，在液體(ti)中(zhong)也是做(zuo)布朗運(yun)(yun)動(dong)(dong)的(de)，這(zhe)不足以(yi)說明黑(hei)膠蟲的(de)布朗運(yun)(yun)動(dong)(dong)就(jiu)證明它是生物。

1.4生理上的(de)描述
1.4.1抗性
抗(kang)細菌和抗(kang)霉菌的藥物對(dui)黑膠蟲(chong)均無效，可以保守的判定黑膠蟲(chong)不屬于(yu)細菌。
1.4.2環境抗逆性
將培(pei)養器材150度烘烤8小時，可以消(xiao)除，這(zhe)個(ge)黑(hei)膠蟲(chong)高壓(ya)(ya)滅菌泡酸都不死。可見(jian)黑(hei)膠蟲(chong)可以耐高溫高壓(ya)(ya)，而且還有點(dian)嗜酸，如果證實它是生物(wu)的話，那它很有可能是微生物(wu)，一(yi)種古(gu)菌。
1.4.3營養條(tiao)件
“黑(hei)膠蟲”可(ke)(ke)寄(ji)生(sheng)于(yu)動物細胞，也可(ke)(ke)以生(sheng)存于(yu)培養(yang)基中，依靠細胞和(he)培養(yang)基中的營養(yang)為生(sheng)，并隨細胞傳(chuan)代(dai)而傳(chuan)代(dai)。可(ke)(ke)見“黑(hei)膠蟲”是(shi)一(yi)種異養(yang)生(sheng)物。
2對黑膠蟲的各種猜測及(ji)相(xiang)應的處理
2.1非生物類(lei)
2.1.1細胞碎片(pian)類
在細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培養(yang)(yang)(yang)的(de)(de)時(shi)候， 由于細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)代(dai)(dai)謝(xie)、物(wu)質交(jiao)換(huan)(huan)、周邊環境變化(hua)(hua)，尤(you)其(qi)是在從37度(du)培養(yang)(yang)(yang)箱中(zhong)拿出(chu)(chu)來(lai)觀(guan)(guan)察的(de)(de)過程(cheng)中(zhong)，由于液體培養(yang)(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)比熱較(jiao)大(da)，液內溫(wen)度(du)高于外界(jie)溫(wen)度(du)，造(zao)成冷熱交(jiao)換(huan)(huan)、小范圍(wei)內形成液體流(liu)動(dong)(dong)加(jia)劇，當然這些(xie)小歲末就會(hui)被攪動(dong)(dong)起來(lai)形成似乎“游動(dong)(dong)”的(de)(de)感覺；隨著細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培養(yang)(yang)(yang)的(de)(de)繼續，部分細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)開始衰(shuai)亡，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)膜結構破裂(lie)(lie)，破裂(lie)(lie)之后的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)內容(rong)物(wu)泄露到(dao)培養(yang)(yang)(yang)液中(zhong)。尤(you)其(qi)是溶(rong)酶體的(de)(de)破壞(huai)，連續性(xing)地(di)造(zao)成其(qi)他細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)和(he)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)器的(de)(de)損傷，如(ru)(ru)果(guo)換(huan)(huan)液不很(hen)(hen)勤，又(you)會(hui)出(chu)(chu)現(xian)進一步(bu)破壞(huai)和(he)殘渣(zha)的(de)(de)出(chu)(chu)現(xian)；再者，“黑(hei)焦(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)”問題是很(hen)(hen)多細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培養(yang)(yang)(yang)者已經(jing)(jing)發現(xian)的(de)(de)問題，但到(dao)目前為止(zhi)尚未找到(dao)其(qi)監(jian)測和(he)排除的(de)(de)試劑和(he)手段，這首(shou)先是由于所(suo)謂“黑(hei)焦(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)”病原體根本難(nan)(nan)以收集和(he)捕捉(zhuo)， 這也從另一個(ge)側(ce)面證明(ming)了“黑(hei)焦(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)”問題的(de)(de)難(nan)(nan)以確定(ding)性(xing)；再說任(ren)何(he)一種外來(lai)的(de)(de)微生(sheng)物(wu)在培養(yang)(yang)(yang)基(ji)中(zhong)都會(hui)有(you)生(sheng)命活動(dong)(dong)的(de)(de)反(fan)應(ying)和(he)表(biao)現(xian)，而(er)不是簡單地(di)運(yun)動(dong)(dong)那樣的(de)(de)外觀(guan)(guan)性(xing)表(biao)現(xian)。舉(ju)一個(ge)例子(zi)：如(ru)(ru)果(guo)“黑(hei)焦(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)”的(de)(de)運(yun)動(dong)(dong)狀(zhuang)況已經(jing)(jing)到(dao)了用顯微鏡已經(jing)(jing)可(ke)以觀(guan)(guan)察出(chu)(chu)的(de)(de)程(cheng)度(du)，其(qi)營(ying)養(yang)(yang)(yang)代(dai)(dai)謝(xie)和(he)能量(liang)需求也就可(ke)想而(er)知。這樣，培養(yang)(yang)(yang)液中(zhong)的(de)(de)影(ying)響消(xiao)耗(hao)、酸(suan)堿含量(liang)程(cheng)度(du)等(deng)都要發生(sheng)明(ming)顯變化(hua)(hua)。比如(ru)(ru)說：迅(xun)速的(de)(de)、大(da)含量(liang)的(de)(de)沉淀， pH值的(de)(de)迅(xun)速下降(jiang)，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)大(da)量(liang)破碎(sui)死(si)亡、引發其(qi)它類型微生(sheng)物(wu)侵染(ran)等(deng)等(deng)。而(er)這些(xie)狀(zhuang)況，在所(suo)謂的(de)(de)“黑(hei)焦(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)”感染(ran)中(zhong)，是很(hen)(hen)難(nan)(nan)觀(guan)(guan)察到(dao)的(de)(de)。同時(shi)“黑(hei)焦(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)”的(de)(de)出(chu)(chu)現(xian)而(er)影(ying)響細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)態似乎得不到(dao)有(you)力的(de)(de)證據。倒是細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)態下降(jiang)的(de)(de)時(shi)候，“黑(hei)焦(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)”明(ming)顯增(zeng)多了。很(hen)(hen)有(you)可(ke)能是細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)態下降(jiang)時(shi)，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)衰(shuai)亡產生(sheng)的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)碎(sui)片。所(suo)以黑(hei)膠蟲(chong)(chong)(chong)(chong)屬于細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)碎(sui)片是比較(jiao)可(ke)能和(he)合理的(de)(de)。
2.1.2玻(bo)璃培養(yang)瓶中的類似氧化硅的東西
網上(shang)有一篇文章(zhang)說，黑膠蟲其(qi)實不是(shi)一種生(sheng)物，是(shi)無機物，其(qi)本質是(shi)玻(bo)璃(li)培(pei)養(yang)瓶里的硅顆(ke)粒。可影響細胞(bao)生(sheng)長，細胞(bao)狀態好時，不明(ming)顯。細胞(bao)狀態較差，數量少時才容易看到，zui好的辦法是(shi)用一次性培養瓶(ping)，可消除黑(hei)膠蟲影響。
2.1.3血清聚合物(wu)產物(wu)
gibco公司的血清說明，此(ci)物(wu)為血清聚合產物(wu)，而不是微生物(wu)
2.2生(sheng)物類
2.2.1支(zhi)原體
有(you)人(ren)曾認為黑膠可能是支原體污染，因為相對比較權(quan)wei的(de)網站文章指出，黑膠(jiao)蟲(chong)可以通過濾膜，可以在空(kong)氣中傳播(bo)。而恰巧口腔支(zhi)原(yuan)(yuan)體為人(ren)體口腔中之(zhi)正(zheng)常菌(jun)叢，所以實驗室之(zhi)操(cao)作人(ren)員(yuan)的(de)污(wu)染亦(yi)可能為支(zhi)原(yuan)(yuan)體的(de)污(wu)染源。但(dan)有人(ren)為此做了實驗證明黑膠(jiao)蟲(chong)不會是支(zhi)原(yuan)(yuan)體，原(yuan)(yuan)因(yin)如下：
1、光(guang)鏡下(xia)可見, 因為體積不對(dui)，支(zhi)原體在普通顯微鏡下(xia)不能看到。
2、多(duo)種染色(se)(se)(se)(se)后可(ke)見，甚(shen)至hoechst即能將它(ta)染色(se)(se)(se)(se),一(yi)般來說支原(yuan)體用(yong)普通染色(se)(se)(se)(se)法(fa)不(bu)易著(zhu)色(se)(se)(se)(se)，用(yong)姬姆薩(sa)染色(se)(se)(se)(se)很淺，革蘭染色(se)(se)(se)(se)為陰性。所以，黑膠蟲是一(yi)種支原(yuan)體的可(ke)能性比較小。
2.2.2真菌
有很多人(ren)發現類似黑膠蟲的，但zui后確定是(shi)真菌(jun)(jun)(jun)，二性(xing)霉素(su)B對(dui)其有效(xiao)。那(nei)說(shuo)明黑(hei)(hei)膠(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)不存(cun)在只是(shi)細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)中(zhong)的(de)真菌(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)(ran)，還是(shi)說(shuo)明黑(hei)(hei)膠(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)污(wu)染(ran)(ran)(ran)屬于真菌(jun)(jun)(jun)類污(wu)染(ran)(ran)(ran)物。如果(guo)黑(hei)(hei)膠(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)是(shi)一(yi)種(zhong)真菌(jun)(jun)(jun)，那(nei)么由(you)此引起的(de)污(wu)染(ran)(ran)(ran)是(shi)不會引起那(nei)么多人的(de)關注，即(ji)使它很特殊(shu)。但(dan)是(shi)這不能排(pai)除那(nei)些(xie)認為(wei)“黑(hei)(hei)膠(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)”是(shi)真菌(jun)(jun)(jun)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)者，看到的(de)只是(shi)一(yi)般真菌(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)(ran)。由(you)于細(xi)胞(bao)(bao)被感染(ran)(ran)(ran)了，要進行(xing)拯救處理，不像理論上那(nei)么簡(jian)單，稍(shao)有不注意都是(shi)很容(rong)易導(dao)致培養(yang)失敗，所(suo)以黑(hei)(hei)膠(jiao)(jiao)蟲(chong)(chong)是(shi)一(yi)種(zhong)真菌(jun)(jun)(jun)也是(shi)不太可能。
2.2.3寄生類原蟲
黑膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)屬于(yu)(yu)寄生(sheng)(sheng)類(lei)(lei)的原蟲(chong)(chong)(chong)，而(er)不(bu)(bu)是(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌(jun)、支原體，也(ye)不(bu)(bu)是(shi)什么補(bu)體、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)碎片或蛋白沉淀。有(you)人在400倍(bei)以(yi)上(shang)的高倍(bei)鏡(jing)下可以(yi)清楚的看到膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)有(you)兩種(zhong)不(bu)(bu)同(tong)形(xing)態，一(yi)(yi)種(zhong)較(jiao)大(da)，運動(dong)較(jiao)慢，泛紅光；另(ling)一(yi)(yi)種(zhong)較(jiao)小(xiao)，運動(dong)較(jiao)快，紅中(zhong)(zhong)(zhong)帶(dai)綠，個(ge)小(xiao)的圍著(zhu)個(ge)大(da)的分布，很可能是(shi)公(gong)的圍著(zhu)雌的。這(zhe)種(zhong)生(sheng)(sheng)物也(ye)并非離開細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)就不(bu)(bu)能存活，也(ye)有(you)人做過這(zhe)樣的試驗(yan)，單(dan)純培養(yang)過污(wu)染膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)的血清4周，直到滿(man)視(shi)野都是(shi)黑煤渣般的膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)。給人的感(gan)覺是(shi)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)和(he)(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)一(yi)(yi)樣有(you)叢集性，如果(guo)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)密度低則(ze)生(sheng)(sheng)長緩慢，如果(guo)手(shou)懶，拖了幾天沒換液(ye)，待(dai)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)生(sheng)(sheng)長到一(yi)(yi)定濃度后便(bian)會(hui)飛速(su)分生(sheng)(sheng)，細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)受感(gan)染的程度也(ye)大(da)，這(zhe)時除了培養(yang)基中(zhong)(zhong)(zhong)可見外，細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)表面通常也(ye)象長滿(man)了粉刺(ci)，所(suo)以(yi)有(you)人認為細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)旁分泌(mi)的某些因子(zi)可以(yi)抑制膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)的生(sheng)(sheng)長。據說，中(zhong)(zhong)(zhong)國病(bing)毒所(suo)和(he)(he)軍科院(yuan)鑒定是(shi)一(yi)(yi)種(zhong)寄生(sheng)(sheng)于(yu)(yu)牛血清內的一(yi)(yi)種(zhong)原蟲(chong)(chong)(chong)，似乎和(he)(he)草履蟲(chong)(chong)(chong)和(he)(he)變形(xing)蟲(chong)(chong)(chong)有(you)類(lei)(lei)似之處，然而(er)由于(yu)(yu)課(ke)題經費(fei)不(bu)(bu)夠而(er)不(bu)(bu)能繼(ji)續進(jin)行下去。由此黑膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)屬于(yu)(yu)原蟲(chong)(chong)(chong)的有(you)比(bi)較(jiao)大(da)的可能性。

3關(guan)于(yu)黑膠蟲出現(xian)的幾種情況(kuang)
1.“黑(hei)膠(jiao)蟲(chong)”的(de)(de)(de)(de)出現常在(zai)培(pei)養條件改變、細(xi)(xi)胞接(jie)種密度降(jiang)低、細(xi)(xi)胞狀(zhuang)態(tai)不(bu)佳(jia)時顯現并(bing)使實(shi)驗中(zhong)斷，尤其(qi)在(zai)凍存細(xi)(xi)胞復蘇時可造成(cheng)大量細(xi)(xi)胞死亡。就(jiu)是在(zai)細(xi)(xi)胞生(sheng)長(chang)(chang)(chang)狀(zhuang)態(tai)不(bu)良時，黑(hei)膠(jiao)蟲(chong)容易(yi)出現。“黑(hei)膠(jiao)蟲(chong)”生(sheng)長(chang)(chang)(chang)與細(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)(de)生(sheng)長(chang)(chang)(chang)有(you)此消彼長(chang)(chang)(chang)的(de)(de)(de)(de)關(guan)系，即當細(xi)(xi)胞狀(zhuang)態(tai)好(hao)時小黑(hei)點會(hui)相(xiang)應的(de)(de)(de)(de)減少；反(fan)之(zhi)則增加，似(si)乎(hu)有(you)細(xi)(xi)胞競爭生(sheng)長(chang)(chang)(chang)的(de)(de)(de)(de)關(guan)系，但總的(de)(de)(de)(de)來說它的(de)(de)(de)(de)出現似(si)乎(hu)并(bing)不(bu)影響細(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)(de)生(sheng)長(chang)(chang)(chang)。
2.細(xi)胞剛用的時候，觀(guan)察均生長良(liang)好，密度適中(zhong)，培養液清亮，小黑點(dian)一般不出現，但是對細(xi)胞傳(chuan)代(dai)以后就陸續出現多少(shao)不等的小黑點(dian)，有時候在一夜之間暴(bao)長。細(xi)胞進過多次傳(chuan)代(dai)的情況下(xia)，也會使(shi)黑膠蟲(chong)出現。
3.換用了其他公司(si)的(de)(de)(de)血(xue)(xue)清，多(duo)是北(bei)(bei)方(fang)公司(si)的(de)(de)(de)血(xue)(xue)清，就(jiu)出現(xian)(xian)了這種非(fei)常類似(si)這里(li)的(de)(de)(de)”黑(hei)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)蟲“的(de)(de)(de)情況。在北(bei)(bei)京醫科大學/中(zhong)國協和醫科大***合出版(ban)社出版(ban)的(de)(de)(de)《現(xian)(xian)代實(shi)驗血(xue)(xue)液學研究方(fang)法與技術 》書中(zhong)關于檢查血(xue)(xue)清中(zhong)寫道，“我(wo)國北(bei)(bei)方(fang)小牛血(xue)(xue)清還多(duo)見黑(hei)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)蟲污染”。其實(shi)在很多(duo)，遭遇黑(hei)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)蟲的(de)(de)(de)案例中(zhong)，大部分(fen)細胞培養(yang)者都認為黑(hei)膠(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)蟲來源于血(xue)(xue)清。

4關于再(zai)細(xi)胞培(pei)養中出現黑膠蟲后的幾種處理(li)建議
1．換好一點的血清，當(dang)然zui好是進口胎牛血(xue)清(qing)(qing)(qing)（國產血(xue)清(qing)(qing)(qing)太臟），就是價(jia)格高(gao)的(de)(de)離譜，經(jing)濟條(tiao)件不(bu)(bu)允許(xu)，可(ke)以用進口新生牛血(xue)清(qing)(qing)(qing)代替(ti)。建(jian)議如果使用的(de)(de)是Hyclone或(huo)GIBCO的(de)(de)血(xue)清(qing)(qing)(qing)可(ke)不(bu)(bu)必滅(mie)活(huo)，這樣可(ke)以有效(xiao)減少“小黑點”的(de)(de)形成(cheng)。一般的(de)(de)血(xue)清(qing)(qing)(qing)都不(bu)(bu)要(yao)去滅(mie)活(huo)處(chu)(chu)理，為什么呢(ni)？INVITROGEN公司在其血(xue)清(qing)(qing)(qing)說明書上解析道：經(jing)過(guo)(guo)正確處(chu)(chu)理的(de)(de)熱(re)滅(mie)活(huo)血(xue)清(qing)(qing)(qing)，對大多數(shu)的(de)(de)細胞而(er)言是不(bu)(bu)需(xu)要(yao)的(de)(de)。經(jing)此(ci)處(chu)(chu)理過(guo)(guo)的(de)(de)血(xue)清(qing)(qing)(qing)對細胞的(de)(de)生長(chang)只有微(wei)小的(de)(de)促(cu)進，或(huo)*沒有任何作用，甚至通常(chang)因為高(gao)溫處(chu)(chu)理影(ying)響了血(xue)清(qing)(qing)(qing)的(de)(de)質量(liang)，而(er)造成(cheng)細胞生長(chang)速(su)率的(de)(de)降低。而(er)經(jing)過(guo)(guo)熱(re)滅(mie)活(huo)的(de)(de)血(xue)清(qing)(qing)(qing)，沉淀物的(de)(de)形成(cheng)會顯(xian)著增(zeng)多，這些沉淀物在倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，像是“小黑點”，常(chang)常(chang)會讓研究者誤以為是血(xue)清(qing)(qing)(qing)遭受污染，而(er)把血(xue)清(qing)(qing)(qing)放在37℃環境中，又會使此(ci)沉淀物geng增多(duo)，使研究(jiu)者誤認(ren)為是微(wei)生物的分裂擴(kuo)增。除(chu)非是在做免疫學研究(jiu)或(huo)培(pei)(pei)養干(gan)細(xi)(xi)胞(bao)、昆蟲(chong)細(xi)(xi)胞(bao)和平滑肌細(xi)(xi)胞(bao)時，才(cai)推薦做熱滅(mie)活(huo)。所以在不(bu)是做免疫學研究(jiu)或(huo)培(pei)(pei)養干(gan)細(xi)(xi)胞(bao)、昆蟲(chong)細(xi)(xi)胞(bao)和平滑肌細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養時，血清(qing)盡量不(bu)經熱滅(mie)活(huo)。

2．如果(guo)是貼壁細胞(bao)的(de)話，可(ke)(ke)用(yong)(yong)無菌的(de)PBS洗(xi)幾(ji)次，可(ke)(ke)一定(ding)程度上緩解(jie)。若(ruo)是懸浮的(de)話，就(jiu)不太好(hao)處(chu)理拉，可(ke)(ke)以向其中少加一點(dian)滋(zi)養細胞(bao)。加滋(zi)養細胞(bao)對有(you)(you)黑(hei)膠蟲的(de)剛復(fu)蘇的(de)細胞(bao)很有(you)(you)效！還(huan)有(you)(you)就(jiu)是實驗環境要注(zhu)意好(hao)，保持細胞(bao)間整(zheng)個環境的(de)潔凈(jing)度。如果(guo)細胞(bao)不是非常珍貴，可(ke)(ke)以用(yong)(yong)伯氨奎、磺胺、四環素(su)、貝(bei)尼(ni)爾，也有(you)(you)建議(yi)慶大霉素(su)500ug/ml洗(xi)滌(di)。
3．換用進口(kou)的(de)一次性(xing)塑(su)料培(pei)養瓶。
4．停止復(fu)蘇，停止養(yang)細(xi)胞(bao)，*消(xiao)毒所(suo)有用于細(xi)胞(bao)培養(yang)的(de)(de)一切(qie)用品，包(bao)括所(suo)用的(de)(de)培養(yang)瓶，培養(yang)基，吸管，胰酶，孵箱，超凈臺、空(kong)間(jian)等等你能(neng)想到(dao)(dao)的(de)(de)和細(xi)胞(bao)培養(yang)相關的(de)(de)所(suo)有物品。一個星期后，再(zai)復(fu)蘇污染之前凍存(cun)的(de)(de)細(xi)胞(bao)，注意你的(de)(de)白大(da)衣(yi)衣(yi)袖污染即(ji)可(ke)。這樣你可(ke)能(neng)覺得動作太大(da)，但可(ke)以用一個星期的(de)(de)時間(jian)挽救(jiu)兩個月的(de)(de)時間(jian)，還(huan)有其(qi)他你為了找到(dao)(dao)污染源，去除污染所(suo)耗費的(de)(de)精力(li)，和財(cai)力(li)。
5．在換液(ye)前先加入生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)并輕輕拍打，沖(chong)洗(xi)干凈后(hou)再(zai)加入培養(yang)液(ye)，堅持天天洗(xi)，傳代(dai)時(shi)加生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)再(zai)離心一(yi)次(ci)，接種密(mi)度稍大(da)一(yi)些，一(yi)段時(shi)間后(hou)，蟲子(zi)就會大(da)大(da)減少，對細胞的生(sheng)長也不會有(you)大(da)的影響。
所有東西zui好重(zhong)配；如果實在要搶(qiang)救，重(zhong)點突破，留幾(ji)瓶污染(ran)不(bu)是很嚴重(zhong)的細胞搶(qiang)救，其余棄去(qu)
6．如(ru)果有其它(ta)可用(yong)的(de)細胞，那么污(wu)染的(de)細胞zui好扔掉；如(ru)沒(mei)有，可(ke)試著用抗生(sheng)素，zui可靠的是(shi)細菌培(pei)養加藥敏，據藥敏結果選擇抗生素，當然不能影響到細胞的狀態。
7．有材料(liao)稱(cheng)minocycline具有一定(ding)的作(zuo)用(yong)，可以和(he)換液(ye)結合起來使用(yong)。
由于黑(hei)膠蟲尚未明確鑒(jian)定出(chu)是什么生物(wu)，所以上述的(de)處理方法(fa)不一(yi)定正確，可(ke)以供(gong)考慮采用。
8.有(you)人為(wei)尋找(zhao)到殺滅“黑膠蟲”的方法，做了一個試驗，他取(qu)有(you)“黑膠蟲”污染的六孔(kong)(kong)板，每孔(kong)(kong)內有(you)2ml培養液(ye)，向有(you)污染的孔(kong)(kong)內分別加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新潔爾滅原液(ye)，邊(bian)(bian)加邊(bian)(bian)在倒(dao)置顯微鏡下觀察。zui后(hou)他得出結論：新(xin)(xin)潔爾(er)滅與水或培(pei)養(yang)基的比例為1：4時(shi)即(ji)可殺死“黑膠(jiao)蟲”。但是新(xin)(xin)潔爾(er)滅對細胞(bao)的負面影響(xiang)太大，比較珍貴的細胞(bao)培(pei)養(yang)zui好(hao)不采用(yong)此方法(fa)。
5.國外關于(yu)黑膠蟲的相關情況
在國(guo)外的生物論(lun)壇上(shang)也(ye)有很多人在討論(lun)black dots 和(he)(he)black particles，也(ye)就是我們所說的黑膠蟲(chong)。他(ta)們所描述black dots 和(he)(he)black particles的情(qing)況，基(ji)本(ben)上(shang)和(he)(he)國(guo)內論(lun)壇上(shang)相似。國(guo)外有人用實驗(yan)證明black dots 或black particles 不是支原體，而在細菌范圍(wei)內。基(ji)本(ben)過程(cheng)如下：If the poster is concerned about mycoplasma, there are tests to identify them. One is a Hoechst dye staining technique to look for extranuclear DNA spots.Also, prepare a dry flame-fixed smear from another aliquot of the media (5-10 ul) and stain with crystal violet. See under microscope at high magnification if there is anything resembling bacteria. And by the way, estimate the size of the particles to be sure it is in the range of bacteria.

6總結
從前面關于(yu)黒(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)的(de)(de)(de)(de)描述可(ke)以(yi)看出(chu)，人們(men)遇到(dao)的(de)(de)(de)(de)黒(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)并(bing)(bing)不(bu)(bu)都(dou)(dou)是(shi)一樣的(de)(de)(de)(de)，有(you)(you)象細菌的(de)(de)(de)(de)、有(you)(you)象支原體的(de)(de)(de)(de)、有(you)(you)象原蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)的(de)(de)(de)(de)、有(you)(you)象真菌的(de)(de)(de)(de)，還有(you)(you)象細胞碎片的(de)(de)(de)(de)。在國內個實驗(yan)室的(de)(de)(de)(de)器材條件(jian)參(can)差(cha)不(bu)(bu)齊，而且實驗(yan)人員的(de)(de)(de)(de)操作質量也(ye)不(bu)(bu)盡相同，同一種現(xian)象也(ye)可(ke)能(neng)有(you)(you)些許(xu)差(cha)異(yi)，當用描述出(chu)來(lai)的(de)(de)(de)(de)現(xian)象的(de)(de)(de)(de)差(cha)異(yi)可(ke)能(neng)變(bian)(bian)大也(ye)可(ke)能(neng)變(bian)(bian)小。所以(yi)很多人看到(dao)細胞被細菌污(wu)染了(le)(le)，不(bu)(bu)好處理，而卻描述出(chu)來(lai)的(de)(de)(de)(de)現(xian)象和流傳的(de)(de)(de)(de)黑(hei)(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)類(lei)似，就會把培養失敗的(de)(de)(de)(de)原因歸結到(dao)無法(fa)處理的(de)(de)(de)(de)黒(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)污(wu)染，甚至可(ke)能(neng)說它發現(xian)的(de)(de)(de)(de)是(shi)真正(zheng)的(de)(de)(de)(de)黑(hei)(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)。這(zhe)樣的(de)(de)(de)(de)事情多了(le)(le)，黑(hei)(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)就會人為(wei)的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)種，象什么(me)的(de)(de)(de)(de)都(dou)(dou)有(you)(you)。黑(hei)(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)是(shi)否存在，還有(you)(you)待于(yu)科(ke)學的(de)(de)(de)(de)發展。但有(you)(you)一點(dian)可(ke)以(yi)肯定的(de)(de)(de)(de)，大部分人發現(xian)的(de)(de)(de)(de)“黒(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)”并(bing)(bing)不(bu)(bu)是(shi)真正(zheng)那個未知的(de)(de)(de)(de)黒(hei)膠(jiao)蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)，而是(shi)不(bu)(bu)很常見(jian)的(de)(de)(de)(de)細菌、真菌、原蟲(chong)(chong)(chong)(chong)(chong)等微生物污(wu)染。