無論新人還是熟(shu)手，細胞污(wu)染都是必須要(yao)面(mian)對(dui)的，那對(dui)于(yu)細胞污(wu)染，我(wo)覺(jue)得zui好(hao)的(de)(de)措施(shi)就是預(yu)防為主，因為細胞一(yi)旦(dan)污(wu)染，想救(jiu)是非常困(kun)難(nan)的(de)(de)，即(ji)便救(jiu)活，細胞狀態也會差(cha)很(hen)多(duo)。所以我先來說(shuo)下我是怎么預(yu)防細胞污(wu)染的(de)(de)。

      生物(wu)安全柜是處理細(xi)(xi)胞(bao)的(de)主(zhu)要場(chang)所，也是細(xi)(xi)胞(bao)發(fa)生污染的(de)主(zhu)要場(chang)所，所以安全柜的(de)正確使用(yong)是預(yu)防(fang)細(xi)(xi)胞(bao)污染的(de)di一步。那么安全柜內需要(yao)注意的小細節有哪些呢？

       首先，所(suo)有進(jin)入(ru)(ru)(ru)安(an)全柜(ju)的(de)東西在進(jin)入(ru)(ru)(ru)前都(dou)要用75%的(de)酒精(jing)消(xiao)毒。特(te)別要注意(yi)的(de)是我(wo)們的(de)手，只要出了安(an)全柜(ju)，再進(jin)入(ru)(ru)(ru)安(an)全柜(ju)前都(dou)要噴75%的(de)酒精(jing)消(xiao)毒。實驗耗(hao)材盡(jin)量放置在合適(shi)的(de)容器內(nei)(nei)用報紙包(bao)好后(hou)滅(mie)菌(jun)，如*頭插入(ru)(ru)(ru)*頭盒，其他(ta)不規則(ze)的(de)耗(hao)材可放入(ru)(ru)(ru)鋁制飯盒內(nei)(nei)。*頭插入(ru)(ru)(ru)*頭盒時要帶手套(tao)，因為滅(mie)菌(jun)可能無法去除*頭上可能粘附的(de)油(you)脂(zhi)或其他(ta)雜質。

       其(qi)次，安全(quan)柜內的(de)東西(xi)要(yao)(yao)擺放(fang)有序(xu)，這(zhe)個可以(yi)根據個人使用(yong)(yong)(yong)習(xi)慣而(er)定（如(ru)果站(zhan)友使用(yong)(yong)(yong)的(de)是(shi)公用(yong)(yong)(yong)安全(quan)柜，則可能需要(yao)(yao)使用(yong)(yong)(yong)前臨時調整(zheng)），以(yi)我(wo)為(wei)(wei)例，移液(ye)器和*頭盒（各種規格備齊）放(fang)右(you)邊(bian)，實驗中需要(yao)(yao)使用(yong)(yong)(yong)的(de)試劑放(fang)右(you)前方(fang)，廢液(ye)缸放(fang)左(zuo)前方(fang)，并保證(zheng)和試劑有一定安全(quan)距離，右(you)角放(fang)置(zhi)培養(yang)皿，左(zuo)角放(fang)置(zhi)其(qi)他(ta)(ta)耗材（如(ru)試管等），盡(jin)量保證(zheng)常用(yong)(yong)(yong)的(de)東西(xi)放(fang)右(you)手(shou)邊(bian)（左(zuo)撇站(zhan)友相(xiang)反），次常用(yong)(yong)(yong)的(de)東西(xi)放(fang)左(zuo)手(shou)邊(bian)（左(zuo)撇站(zhan)友相(xiang)反），右(you)邊(bian)操作區(qu)域為(wei)(wei)潔凈區(qu)，左(zuo)邊(bian)為(wei)(wei)非(fei)潔凈區(qu)（如(ru)廢液(ye)缸和其(qi)他(ta)(ta)用(yong)(yong)(yong)剩材料）。

       再(zai)次(ci)(ci)，由于使用安全柜的過程中手(shou)和前臂都(dou)是要進入安全柜的，所(suo)以有條(tiao)件(jian)(jian)的站(zhan)友應該準備(bei)至(zhi)少一(yi)件(jian)(jian)細胞(bao)(bao)房(fang)連體潔(jie)凈服（裝入布(bu)袋消毒(du)后烘干，在細胞(bao)(bao)房(fang)中取出，非更換前不得穿出細胞(bao)(bao)房(fang)），沒(mei)有條(tiao)件(jian)(jian)的站(zhan)友則(ze)至(zhi)少準備(bei)一(yi)副套袖，每次(ci)(ci)用完(wan)后放安全柜中紫外消毒(du)。

       在準備(bei)(bei)工作一切就緒后(hou)，細(xi)(xi)胞的處理過程(cheng)也是大家需要注意(yi)的。細(xi)(xi)胞處理前(qian)應將(jiang)當次實驗(yan)需要的各(ge)種試劑、耗材(cai)準備(bei)(bei)齊備(bei)(bei)，盡(jin)量減少細(xi)(xi)胞處理過程(cheng)中的來回走動。安全(quan)柜(ju)使用前(qian)zui好紫外照(zhao)射30min滅菌，然后通風5min保證換氣(qi)到位(wei)。實驗(yan)過(guo)程中，所(suo)有(you)試(shi)劑zui好不(bu)(bu)用就蓋上瓶(ping)(ping)蓋，如(ru)果需要打開瓶(ping)(ping)蓋，則除了干(gan)凈的*頭，其他(ta)任(ren)何東(dong)西都(dou)不(bu)(bu)要從瓶(ping)(ping)口的正上方經過，防止試劑污染(ran)。細胞培養(yang)若(ruo)使(shi)用培養(yang)皿(min)，則zui好不要(yao)(yao)長(chang)(chang)時(shi)間打(da)開皿(min)蓋。另外移(yi)(yi)液器(qi)(qi)也(ye)是(shi)細胞(bao)污(wu)染的(de)一個隱藏(zang)途徑，特別是(shi)使用無(wu)濾芯*頭的(de)站友，在吸(xi)(xi)取試劑(ji)(ji)時(shi)，很容易不小心(xin)將試劑(ji)(ji)倒吸(xi)(xi)入移(yi)(yi)液器(qi)(qi)，如果發生這種情況(kuang)，要(yao)(yao)及(ji)時(shi)用酒(jiu)精棉球擦去倒吸(xi)(xi)的(de)試劑(ji)(ji)，特別是(shi)培養基，極易成為細菌生長(chang)(chang)的(de)溫床。一把(ba)污(wu)染的(de)移(yi)(yi)液器(qi)(qi)可以輕松污(wu)染站友的(de)所有細胞(bao)，甚至(zhi)整(zheng)個實驗室(shi)的(de)細胞(bao)，所以友情推薦有條件的(de)站友在處(chu)理細胞(bao)時(shi)一定(ding)要(yao)(yao)使用帶(dai)濾芯的(de)*頭。當(dang)然(ran)即便是(shi)使用帶(dai)濾芯的(de)*頭，也(ye)要(yao)(yao)盡(jin)量避免試劑(ji)(ji)倒吸(xi)(xi)，因(yin)為想(xiang)要(yao)(yao)*去除倒吸(xi)(xi)入移(yi)(yi)液器(qi)(qi)的(de)試劑(ji)(ji)非常困(kun)難(nan)。

       培養(yang)箱作為細(xi)(xi)胞培養(yang)的場所，也需(xu)要站友留心。由于培養(yang)箱內(nei)的溫度(du)和(he)濕度(du)很(hen)高(gao)，是很(hen)適宜(yi)細(xi)(xi)菌生長(chang)的，所以如(ru)果有(you)條件（實(shi)驗室有(you)2個(ge)或(huo)以上培養(yang)箱），zui好定期(qi)用75%酒精擦拭培養(yang)箱，及時定期(qi)更換培養(yang)箱內水槽。

       那么(me)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)如果還是(shi)不(bu)幸污(wu)染(ran)(ran)了，那又該怎么(me)辦呢？我(wo)把細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)污(wu)染(ran)(ran)分為早(zao)期(qi)(qi)和晚期(qi)(qi)兩種。早(zao)期(qi)(qi)污(wu)染(ran)(ran)是(shi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀態變(bian)(bian)差(cha)，但(dan)依舊能保持生(sheng)(sheng)(sheng)長，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下（光鏡(jing)）不(bu)可(ke)見(jian)明(ming)顯(xian)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)或可(ke)見(jian)少量微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)，這(zhe)時候我(wo)們在換液時建議多用(yong)PBS洗幾次，然(ran)后(hou)用(yong)雙抗原液侵潤細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)1-2min，吸(xi)去，再加(jia)入正常培(pei)養基。早(zao)期(qi)(qi)污(wu)染(ran)(ran)只要發現(xian)及(ji)時，處理(li)得(de)當，救回(hui)來的可(ke)能性(xing)還是(shi)很大(da)的。晚期(qi)(qi)污(wu)染(ran)(ran)則是(shi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)形態發生(sheng)(sheng)(sheng)明(ming)顯(xian)改(gai)變(bian)(bian)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)停止(zhi)生(sheng)(sheng)(sheng)長，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下可(ke)見(jian)明(ming)顯(xian)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)。這(zhe)時候我(wo)建議大(da)家(jia)及(ji)時清(qing)理(li)掉相關細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，以(yi)免污(wu)染(ran)(ran)其他(ta)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，重新復蘇更(geng)早(zao)批次的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)。所以(yi)大(da)家(jia)會發現(xian)，新細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)收到后(hou)，不(bu)應急于開展實(shi)驗，而應該先小心培(pei)養，凍存(cun)(cun)1到2個(ge)批次的早(zao)期(qi)(qi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，然(ran)后(hou)再開展實(shi)驗，這(zhe)樣實(shi)驗細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)一旦出現(xian)問題，可(ke)以(yi)有庫存(cun)(cun)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)保證(zheng)實(shi)驗還能繼(ji)續進行。